የሕዋስ ባህል ብክለት ውጤታማ በሆነ ሁኔታ ቀንሷል

የሕዋስ ባህሎች መበከል በቀላሉ በሴል ባህል ላብራቶሪዎች ውስጥ በጣም የተለመደ ችግር ሊሆን ይችላል, አንዳንዴም በጣም አስከፊ መዘዝ ያስከትላል.የሕዋስ ባህል መበከሎች በሁለት ምድቦች ሊከፈሉ ይችላሉ-የኬሚካል ብክሎች እንደ መካከለኛ, የሴረም እና የውሃ ቆሻሻዎች, ኢንዶቶክሲን, ፕላስቲከርስ እና ዲተርጀንት እና ባዮሎጂካል ብክሎች እንደ ባክቴሪያ, ሻጋታ, እርሾ, ቫይረሶች, mycoplasmas መስቀል ኢንፌክሽን.በሌሎች የሴል መስመሮች የተበከለ.ብክለትን ሙሉ በሙሉ ማስወገድ ባይቻልም ምንጩን በሚገባ በመረዳት እና ጥሩ የአሲፕቲክ ቴክኒኮችን በመከተል ድግግሞሹን እና ክብደቱን መቀነስ ይቻላል።

1. ይህ ክፍል ዋና ዋና የባዮሎጂካል ብክለት ዓይነቶችን ይዘረዝራል-
የባክቴሪያ ብክለት
የሻጋታ እና የቫይረስ መበከል
Mycoplasma ብክለት
የእርሾ መበከል

1.1 የባክቴሪያ ብክለት
ተህዋሲያን በየቦታው የሚገኙ ነጠላ-ሕዋስ ረቂቅ ተሕዋስያን ትልቅ ቡድን ናቸው።ብዙውን ጊዜ በዲያሜትር ውስጥ ጥቂት ማይክሮን ናቸው እና ከሉል እስከ ዘንግ እና ጠመዝማዛዎች ድረስ የተለያዩ ቅርጾች ሊሆኑ ይችላሉ.በየቦታው, በመጠን እና በፍጥነት በማደግ ላይ ያሉ ባክቴሪያዎች, ከእርሾ እና ሻጋታዎች ጋር, በሴል ባህል ውስጥ በጣም የተለመዱ ባዮሎጂያዊ ብክለት ናቸው.

1.1.1 የባክቴሪያ ብክለትን መለየት
የባክቴሪያ ብክለት በቀላሉ ሊበከል ከገባ በኋላ በጥቂት ቀናት ውስጥ ባህሉን በእይታ በመመርመር በቀላሉ ይታወቃል።
የተበከሉ ባህሎች ብዙውን ጊዜ ደመናማ (ማለትም፣ ተርባይድ) ይታያሉ፣ አንዳንዴም ላይ ቀጭን ፊልም።
በባህላዊው መካከለኛ ፒኤች ውስጥ ድንገተኛ ጠብታዎች እንዲሁ በተደጋጋሚ ያጋጥማሉ።
አነስተኛ ኃይል ባለው ማይክሮስኮፕ፣ ባክቴሪያዎቹ ጥቃቅን ሆነው ይታያሉ፣ በሴሎች መካከል የሚንቀሳቀሱ ጥራጥሬዎች፣ እና ከፍተኛ ኃይል ባለው ማይክሮስኮፕ ምልከታ የእያንዳንዱን ተህዋሲያን ቅርጾች መፍታት ይችላል።

1.2 የሻጋታ እና የቫይረስ መበከል
1.2.1 የሻጋታ ብክለት
ሻጋታዎች ሃይፋ በሚባለው ባለ ብዙ ሴሉላር ክር መልክ የሚበቅሉ የፈንገስ መንግሥት eukaryotic microorganisms ናቸው።የእነዚህ መልቲሴሉላር ክሮች ተያያዥ ኔትወርኮች ቅኝ ግዛት ወይም ማይሲሊየም የሚባሉ በጄኔቲክ ተመሳሳይ ኒዩክሊየሮች ይዘዋል ።

ከእርሾ መበከል ጋር በሚመሳሰል መልኩ የባህሉ ፒኤች በመጀመሪያ የብክለት ደረጃ ላይ የተረጋጋ ሲሆን ባህሉ በከፍተኛ ሁኔታ በመበከል እና ደመናማ እየሆነ ሲመጣ በፍጥነት ይጨምራል።በአጉሊ መነጽር ሲታይ ማይሲሊየም ብዙውን ጊዜ ፋይበር ነው ፣ አንዳንድ ጊዜ እንደ ጥቅጥቅ ያሉ የስፖሮች ስብስቦች።የበርካታ ሻጋታዎች ስፖሮች በእንቅልፍ ጊዜያቸው እጅግ በጣም አስቸጋሪ እና ምቹ ባልሆኑ አካባቢዎች ውስጥ ሊኖሩ ይችላሉ እና የሚነቃቁት ትክክለኛ የእድገት ሁኔታዎች ሲያጋጥሙ ብቻ ነው።

1.2.2 የቫይረስ መበከል
ቫይረሶች ለመራባት የሴል ማሽነሪዎችን የሚወስዱ ጥቃቅን ተላላፊ ወኪሎች ናቸው.በጣም ትንሽ መጠናቸው በባህል ውስጥ ለመለየት እና በሴል ባህል ቤተ ሙከራ ውስጥ ጥቅም ላይ ከሚውሉት ሬጀንቶች ለማስወገድ አስቸጋሪ ያደርጋቸዋል።አብዛኛዎቹ ቫይረሶች ለአስተናጋጆቻቸው በጣም ጥብቅ የሆኑ መስፈርቶች ስላሏቸው, አብዛኛውን ጊዜ ከአስተናጋጁ በስተቀር የሴል ባህሎችን አይጎዱም.
ይሁን እንጂ በቫይረስ የተያዙ የሕዋስ ባሕሎችን መጠቀም በላብራቶሪ ሠራተኞች ጤና ላይ በተለይም የሰው ወይም የመጀመሪያ ደረጃ ህዋሶች በቤተ ሙከራ ውስጥ የሚበቅሉ ከሆነ ከባድ አደጋ ሊያስከትሉ ይችላሉ።

በሴል ባህሎች ውስጥ ያለው የቫይረስ ኢንፌክሽን በኤሌክትሮን ማይክሮስኮፕ ፣ ፀረ እንግዳ አካላት ስብስብ ፣ ELISA ፣ ወይም PCR በተገቢው የቫይረስ ፕሪሚየርስ ሊታወቅ ይችላል።

1.3 Mycoplasma ብክለት
Mycoplasmas የሕዋስ ግድግዳዎች የሌሉባቸው ቀላል ባክቴሪያዎች ናቸው, እና በጣም ትንሹ እራሳቸውን የሚባዙ ፍጥረታት እንደሆኑ ይታሰባል.እጅግ በጣም ትንሽ በሆነ መጠን (ብዙውን ጊዜ ከ 1 ማይክሮን ያነሰ) mycoplasma በጣም ከፍተኛ እፍጋቶች ላይ እስኪደርሱ እና የሕዋስ ባህሎች እንዲበላሹ እስኪያደርጉ ድረስ ለመለየት አስቸጋሪ ነው;እስከዚያው ድረስ, ብዙውን ጊዜ ግልጽ የሆነ የኢንፌክሽን ምልክት የለም.

1.3.1 የ mycoplasma ብክለትን መለየት
አንዳንድ ቀስ በቀስ በማደግ ላይ ያሉ mycoplasmas የሕዋስ ሞት ሳያስከትሉ በባህሎች ውስጥ ሊቆዩ ይችላሉ ነገር ግን በባህሎች ውስጥ የሴል ሴሎችን ባህሪ እና ሜታቦሊዝም ይለውጣሉ።

ሥር የሰደደ mycoplasma ኢንፌክሽን በተቀነሰ የሕዋስ መስፋፋት ፣የሙሌት መጠጋጋት እና በእገዳ ባህል ውስጥ መጨመር ሊታወቅ ይችላል።
ሆኖም የ mycoplasma ብክለትን ለመለየት ብቸኛው አስተማማኝ መንገድ የፍሎረሰንት ቀለም (ለምሳሌ Hoechst 33258) ፣ ELISA ፣ PCR ፣ immunostaining ፣ autoradiography ወይም microbial test በመጠቀም ባህሉን በየጊዜው መሞከር ነው።

1.4 የእርሾ ብክለት
እርሾዎች የፈንገስ መንግሥት ባለ አንድ ሕዋስ eukaryotes ናቸው፣ መጠናቸው ከጥቂት ማይክሮን (ብዙውን ጊዜ) እስከ 40 ማይክሮን (አልፎ አልፎ) ነው።

1.4.1 የእርሾን መበከል መለየት
ልክ እንደ ባክቴሪያ ብክለት, በእርሾ የተበከሉ ባህሎች ደመናማ ሊሆኑ ይችላሉ, በተለይም ብክለቱ በከፍተኛ ደረጃ ላይ ከሆነ.በእርሾ የተበከሉት የባህሎች ፒኤች ብክለቱ ይበልጥ ከባድ እስኪሆን ድረስ በጣም ትንሽ ይቀየራል፣ በዚህ ደረጃ ፒኤች አብዛኛውን ጊዜ ይጨምራል።በአጉሊ መነጽር፣ እርሾ እንደ ግለሰባዊ ኦቮይድ ወይም ሉላዊ ቅንጣቶች ይታያል እና ትናንሽ ቅንጣቶችን ሊያመጣ ይችላል።

2.Cross ኢንፌክሽን
እንደ ረቂቅ ተህዋሲያን መበከል የተለመደ ባይሆንም ብዙ የሕዋስ መስመሮችን ከሄላ እና ሌሎች በፍጥነት በማደግ ላይ ያሉ የሕዋስ መስመሮችን መበከል ከባድ መዘዝ ያለው በግልጽ የተቀመጠ ችግር ነው።ከታዋቂ የሴል ባንኮች የሕዋስ መስመሮችን ያግኙ፣ የሕዋስ መስመሮቹን ባህሪያት በመደበኛነት ያረጋግጡ እና ጥሩ አሴፕቲክ ዘዴዎችን ይጠቀሙ።እነዚህ ልምዶች መሻገርን ለማስወገድ ይረዳሉ.የዲኤንኤ የጣት አሻራ፣ ካሪዮቲፒንግ እና isotyping በሴል ባህልዎ ውስጥ የብክለት ብክለት መኖሩን ማረጋገጥ ይችላሉ።

እንደ ረቂቅ ተህዋሲያን መበከል የተለመደ ባይሆንም ብዙ የሕዋስ መስመሮችን ከሄላ እና ሌሎች በፍጥነት በማደግ ላይ ያሉ የሕዋስ መስመሮችን መበከል ከባድ መዘዝ ያለው በግልጽ የተቀመጠ ችግር ነው።ከታዋቂ የሴል ባንኮች የሕዋስ መስመሮችን ያግኙ፣ የሕዋስ መስመሮቹን ባህሪያት በመደበኛነት ያረጋግጡ እና ጥሩ አሴፕቲክ ቴክኒኮችን ይጠቀሙ።እነዚህ ልምዶች መበከልን ለማስወገድ ይረዳሉ.የዲኤንኤ የጣት አሻራ፣ ካሪዮቲፒንግ እና isotyping በሴል ባህልዎ ውስጥ የብክለት ብክለት መኖሩን ማረጋገጥ ይችላሉ።