የሕዋስ ባህል አካባቢ የሕዋስ ምርትን ይነካል

የሕዋስ ባህል ዋና ጥቅሞች አንዱ የሕዋስ መራባት አካላዊ ኬሚስትሪን (ማለትም የሙቀት መጠን ፣ ፒኤች ፣ የአስሞቲክ ግፊት ፣ O2 እና CO2 ውጥረት) እና የፊዚዮሎጂ አካባቢ (ማለትም የሆርሞን እና የንጥረ-ምግብ ትኩረት) የመቆጣጠር ችሎታ ነው።ከሙቀት በተጨማሪ የባህላዊ አከባቢ በእድገት መካከለኛ ቁጥጥር ይደረግበታል.

ምንም እንኳን የባህሉ ፊዚዮሎጂያዊ አከባቢ እንደ አካላዊ እና ኬሚካላዊ አካባቢው ግልፅ ባይሆንም ፣ ስለ ሴረም አካላት የተሻለ ግንዛቤ ፣ ለማስፋፋት የሚያስፈልጉትን የእድገት ሁኔታዎችን መለየት እና በባህል ውስጥ ያሉ ህዋሳትን ማይክሮ ሆሎሪን በደንብ መረዳት።(ማለትም የሴል-ሴል መስተጋብር፣ የጋዝ ስርጭት፣ ከማትሪክስ ጋር ያለው መስተጋብር) አሁን የተወሰኑ የሕዋስ መስመሮችን ከሴረም-ነጻ ሚዲያ ውስጥ እንዲዳብሩ ያስችላቸዋል።

1.የባህል አካባቢ የሕዋስ እድገትን ይነካል
እባኮትን ያስተውሉ የሕዋስ ባህል ሁኔታ ለእያንዳንዱ የሕዋስ ዓይነት የተለየ ነው።
ለአንድ የተወሰነ የሕዋስ ዓይነት ከሚያስፈልጉት የባህል ሁኔታዎች ማፈንገጡ የሚያስከትላቸው መዘዞች ያልተለመዱ ፍኖታይፖችን ከመግለጽ አንስቶ የሕዋስ ባህል ሙሉ በሙሉ ሽንፈት ይደርሳል።ስለዚህ, የሚፈልጉትን የሕዋስ መስመር በደንብ እንዲያውቁ እና በሙከራዎ ውስጥ ለሚጠቀሙት እያንዳንዱ ምርት የሚሰጠውን መመሪያ በጥብቅ እንዲከተሉ እንመክራለን.

2. ለሴሎችዎ የተመቻቸ የሕዋስ ባህል አካባቢ ለመፍጠር የሚደረጉ ጥንቃቄዎች፡-
የባህል ሚዲያ እና ሴረም (ለበለጠ መረጃ ከታች ይመልከቱ)
pH እና CO2 ደረጃዎች (ለበለጠ መረጃ ከታች ይመልከቱ)
ፕላስቲክን ማልማት (ለበለጠ መረጃ ከታች ይመልከቱ)
የሙቀት መጠን (ለበለጠ መረጃ ከታች ይመልከቱ)

2.1 የባህል ሚዲያ እና ሴረም
የባህል ማእከሉ የባህላዊ አከባቢ በጣም አስፈላጊው ክፍል ነው, ምክንያቱም ለሴሎች እድገት የሚያስፈልጉትን ንጥረ-ምግቦች, የእድገት ምክንያቶች እና ሆርሞኖችን ያቀርባል, እና የባህሉን ፒኤች እና ኦስሞቲክ ግፊት ይቆጣጠራል.

ምንም እንኳን የመጀመሪያዎቹ የሕዋስ ባህል ሙከራዎች የተከናወኑት ከቲሹ ውህዶች እና ከሰውነት ፈሳሾች የተገኙ ተፈጥሯዊ ሚዲያዎችን በመጠቀም ቢሆንም ፣የደረጃው አስፈላጊነት ፣የመገናኛ ብዙሃን ጥራት እና ፍላጎት መጨመር ትክክለኛ ሚዲያ እንዲፈጠር ምክንያት ሆኗል ።ሶስቱ መሰረታዊ የሚዲያ ዓይነቶች ባሳል ሚዲያ፣ የተቀነሰ ሴረም ሚዲያ እና ሴረም-ነጻ ሚዲያ ሲሆኑ ለሴረም ማሟያ የተለያዩ መስፈርቶች አሏቸው።

2.1.1 መሰረታዊ መካከለኛ
ጊብኮ ሕዋስ ባህል መካከለኛ
አብዛኛዎቹ የሕዋስ መስመሮች አሚኖ አሲዶች፣ ቫይታሚኖች፣ ኦርጋኒክ ያልሆኑ ጨዎችን እና የካርቦን ምንጮችን (እንደ ግሉኮስ ያሉ) በያዙ መሰረታዊ ሚዲያዎች ውስጥ በደንብ ያድጋሉ ነገርግን እነዚህ መሰረታዊ የሚዲያ ቀመሮች በሴረም መሞላት አለባቸው።

2.1.2 የተቀነሰ የሴረም መካከለኛ
ጠርሙስ ከጊብኮ ዝቅተኛ ሴረም መካከለኛ
በሴል ባህል ሙከራዎች ውስጥ የሴረምን አሉታዊ ተፅእኖ ለመቀነስ ሌላው ስልት የሴረም-የተቀነሰ ሚዲያን መጠቀም ነው.የተቀነሰ ሴረም መካከለኛ በንጥረ-ምግብ እና በእንስሳት-የተገኙ ምክንያቶች የበለፀገ መሰረታዊ መካከለኛ ፎርሙላ ሲሆን ይህም የሚፈለገውን የሴረም መጠን ሊቀንስ ይችላል።

2.1.3 ሴረም-ነጻ መካከለኛ
ጠርሙስ ከጊብኮ ሴረም-ነጻ መካከለኛ
ከሴረም ነፃ የሆነ መካከለኛ (ኤስኤፍኤም) ሴረምን በተመጣጣኝ አመጋገብ እና በሆርሞን ቀመሮች በመተካት የእንስሳትን ሴረም አጠቃቀምን ያቋርጣል።ብዙ የመጀመሪያ ደረጃ ባህሎች እና የሴል መስመሮች የቻይናው Hamster Ovary (CHO) recombinant ፕሮቲን ማምረቻ መስመር፣ የተለያዩ የሃይብሪዶማ ሴል መስመሮች፣ የነፍሳት መስመሮች Sf9 እና Sf21 (Spodoptera frugiperda) እንዲሁም ለቫይረስ ምርት አስተናጋጅ ጨምሮ ከሴረም-ነጻ መካከለኛ ቀመሮች አሏቸው። (ለምሳሌ, 293, VERO, MDCK, MDBK) ወዘተ. ከሴረም-ነጻ ሚዲያን መጠቀም ከዋና ዋናዎቹ ጥቅሞች መካከል መካከለኛውን ለተወሰኑ የሴል ዓይነቶች ተስማሚ የሆነ የእድገት ሁኔታዎችን በመምረጥ መካከለኛውን እንዲመርጥ ማድረግ መቻል ነው.የሚከተለው ሰንጠረዥ ከሴረም-ነጻ የሚዲያ ጥቅሞቹን እና ጉዳቶቹን ይዘረዝራል።

ጥቅም
ግልጽነትን ጨምር
የበለጠ ወጥነት ያለው አፈፃፀም
ቀላል የማጥራት እና የታችኛው ሂደት
የሕዋስ ተግባርን በትክክል መገምገም
ምርታማነትን ጨምር
የፊዚዮሎጂ ምላሾችን በተሻለ ሁኔታ መቆጣጠር
የተሻሻለ የሕዋስ ሚዲያ ማግኘት
ጉዳቱ
የሕዋስ ዓይነት የተወሰነ መካከለኛ ቀመር መስፈርቶች
ከፍ ያለ የሬጀንት ንፅህና ያስፈልገዋል
የእድገት ፍጥነት መቀነስ

2.2.1 ፒኤች ደረጃ
አብዛኞቹ መደበኛ አጥቢ ሴል መስመሮች በ pH 7.4 በደንብ ያድጋሉ, እና በተለያዩ የሴል መስመሮች መካከል ያለው ልዩነት ትንሽ ነው.ይሁን እንጂ አንዳንድ የተለወጡ የሕዋስ መስመሮች በትንሹ አሲዳማ በሆነ አካባቢ (pH 7.0 - 7.4) በተሻለ ሁኔታ እንዲያድጉ ታይቷል፣ አንዳንድ መደበኛ ፋይብሮብላስት ሴል መስመሮች ደግሞ በትንሹ የአልካላይን አካባቢን (pH 7.4-7.7) ይመርጣሉ።እንደ Sf9 እና Sf21 ያሉ የነፍሳት ሴል መስመሮች በፒኤች 6.2 በተሻለ ሁኔታ ያድጋሉ።

2.2.2 CO2 ደረጃ
የእድገት መካከለኛው የባህሉን ፒኤች ይቆጣጠራል እና በባህላዊው ውስጥ ያሉትን ህዋሶች የፒኤች ለውጦችን ለመቋቋም ይከላከላል.ብዙውን ጊዜ ይህ ቋት የሚገኘው ኦርጋኒክ (ለምሳሌ HEPES) ወይም CO2-bicarbonate-based buffers በመያዝ ነው።የመካከለኛው ፒኤች መጠን በተሟሟት የካርቦን ዳይኦክሳይድ (CO2) እና bicarbonate (HCO3-) ሚዛን ላይ ስለሚወሰን፣ የከባቢ አየር CO2 ለውጦች የመካከለኛውን ፒኤች ይለውጣሉ።ስለዚህ መካከለኛ ቋት ከ CO2-bicarbonate-based ቋት ጋር ሲጠቀሙ በተለይም ክፍት በሆኑ የባህል ምግቦች ውስጥ ሴሎችን ሲለማመዱ ወይም የተለወጡ የሴል መስመሮችን በከፍተኛ መጠን ሲለማመዱ ውጫዊ CO2 መጠቀም ያስፈልጋል።ምንም እንኳን አብዛኛዎቹ ተመራማሪዎች በአብዛኛው ከ5-7% CO2 በአየር ውስጥ ቢጠቀሙም, አብዛኛዎቹ የሕዋስ ባህል ሙከራዎች አብዛኛውን ጊዜ ከ4-10% CO2 ይጠቀማሉ.ይሁን እንጂ, እያንዳንዱ መካከለኛ ትክክለኛ ፒኤች እና osmotic ግፊት ለማሳካት የሚመከር CO2 ውጥረት እና bicarbonate ትኩረት አለው;ለበለጠ መረጃ እባክዎን የአማካይ አምራቹን መመሪያዎችን ይመልከቱ።

2.3 ፕላስቲኮችን ማልማት
የሕዋስ ባሕል ፕላስቲኮች ለተለያዩ የሕዋስ ባህል አፕሊኬሽኖች ተስማሚ በሆነ መልኩ በተለያዩ ቅርጾች፣ መጠኖች እና ገጽታዎች ይገኛሉ።ለሴል ባሕል ማመልከቻዎ ትክክለኛውን ፕላስቲክ ለመምረጥ እንዲረዳዎ ከዚህ በታች ያለውን የሕዋስ ባህል የፕላስቲክ ገጽ መመሪያን እና የሕዋስ ባህል መያዣ መመሪያን ይጠቀሙ።
ሁሉንም Thermo Scientific Nunc ሕዋስ ባህል ፕላስቲኮችን ይመልከቱ (የማስታወቂያ አገናኝ)

2.4 የሙቀት መጠን
ለሴሎች ባህል በጣም ጥሩው የሙቀት መጠን የሚወሰነው ሴሎቹ በተለዩበት በአስተናጋጁ የሰውነት ሙቀት ላይ ነው ፣ እና በትንሽ የሙቀት መጠን ለውጦች ላይ (ለምሳሌ ፣ የቆዳ ሙቀት ከአጥንት ጡንቻ ያነሰ ሊሆን ይችላል) ).ለሴል ባህል, ከመጠን በላይ ማሞቅ ከመጠን በላይ ማሞቅ የበለጠ ከባድ ችግር ነው.ስለዚህ በማቀፊያው ውስጥ ያለው የሙቀት መጠን ብዙውን ጊዜ ከትክክለኛው የሙቀት መጠን በታች በትንሹ ይቀመጣል።

2.4.1 ለተለያዩ የሴል መስመሮች ምርጥ ሙቀት
አብዛኞቹ የሰው እና አጥቢ እንስሳት ሴል መስመሮች ከ 36 ዲግሪ ሴንቲግሬድ እስከ 37 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ባለው የሙቀት መጠን ለበለጠ ዕድገት ይቀመጣሉ።
የነፍሳት ሴሎች በ 27 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ለምርጥ እድገት ይበቅላሉ;በዝቅተኛ የሙቀት መጠን እና በ 27 ° ሴ እና በ 30 ° ሴ መካከል ባለው የሙቀት መጠን በዝግታ ያድጋሉ.ከ 30 ዲግሪ ሴንቲግሬድ በላይ, የነፍሳት ሕዋሳት ህይወት ይቀንሳል, ወደ 27 ° ሴ ቢመለስም, ሴሎቹ አያገግሙም.
ከፍተኛ እድገትን ለመድረስ የአቪያን ሴል መስመሮች 38.5 ° ሴ ያስፈልጋቸዋል.ምንም እንኳን እነዚህ ሴሎች በ 37 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ሊቆዩ ቢችሉም, ቀስ በቀስ ያድጋሉ.
ከቀዝቃዛ ደም እንስሳት (እንደ አምፊቢያን, ቀዝቃዛ-ውሃ አሳ) የተገኙ የሴል መስመሮች ከ 15 ° ሴ እስከ 26 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ያለውን ሰፊ ​​የሙቀት መጠን ይቋቋማሉ.